ºËËáÌáÈ¡ÊÇÖ¸½«ºËËᣨDNAºÍRNA£©´Óϸ°ûÖÐÌáÈ¡³öÀ´µÄ¹ý³Ì£¬×ܵÄÀ´ËµÔ̺¬Ï¸°ûÁѽ⡢ºËËá´¿»¯¼°ºóÐøºËËáŨ¶È¡¢´¿¶È²â¶¨µÄ²½Ö衣ƾ¾ÝÔʼÑùÆ·µÄÖÖÀàºÍºËËá²úÆ·ºóÐøµÄ¸÷ÀàÀûÓÃÖ÷ÕÅ£¬Ï¸°ûÁѽâºÍºËËá´¿»¯²½ÖèÓÐ·ÖÆçµÄ´¦Öò½ÖèºÍÒªÇó¡£
Ò»¡¢³¢ÊÔÊÒÖеÄDNAÌáÈ¡£º
°¸ÀýÒ»£ºÓ×Êó»ùÒòÐÍÅж¨³¢ÊÔµÄÄ£°åDNAÌáÈ¡
³õʼÑùƷΪÓ×ÊóβÇжΡ£»ùÒòÐÍÅж¨³¢ÊÔ¶ÔDNAÄ£°åµÄŨ¶È¡¢´¿¶ÈÒªÇ󲻸ߣ¬Ïû»¯ÌáÈ¡¹ý³ÌÏà¶Ôµ¥Ò»¡£
³¢ÊÔ²½Ö裺
1.½«1cmβ°ÍÇжÎÖÃÓÚ1.5mL΢Á¿ÀëÐĹÜÖУ¬²ÎÓëÊÊÁ¿ÁѽâÒº£¨Lysis buffer£©ºÍµ°°×ø£¨Proteinase K£©ÓÚ55~65¡æË®Ô¡¹ýÒ¹Ïû»¯¡£
2.³ä·ÖÏû»¯ºóµÄβ°ÍÑùÆ·²ÎÓë³ÁµíÒº£¨Precipitation buffer£©ºóÓÃÐýÎлìÔÈÆ÷À´Ê¹ÔÓÖʵ°°×³ä·Ö³Áµí£¬ÔÓÖʳÁµíºóͨ¹ýÀëÐIJÙ×÷£¨Èç4¡æ£¬4000Xg£¬5min£©£¬È¡³öÈÜÓÐÖ¸±êDNAµÄÉÏÇåÒº£¬ÅׯúÔÓÖʳÁµí¡£
3.ÉÏÇåÒºÖвÎÓë100%Òì±û´¼£¬Ó×Ðĵߵ¹ÀëÐĹÜ30~40´Î£¬±ãÄܹ»½«²úÆ·DNA³Á½µ¡£ÀëÐIJÙ×÷£¨4¡æ£¬10000Xg»ò12000rpm£¬10min£©È¥³ýÉÏÇå¡£
4.ÓÃ75%ÒÒ´¼Ï´µÓÁ½´ÎDNA²úÆ·£¬´ýÒÒ´¼³ä·Ö»Ó·¢ºó£¬ÓÃË®»òTE»º³åÒº£¨Tris-EDTA buffer£©ÊÕ³ÉDNAÄ£°å²úÆ·¡£
½øÐкóÐøµÄPCRÀ©Ôö³¢ÊÔǰ£¬Äܹ»Ê¹ÓÃNanodropÒÇÆ÷À´½øÐÐDNAŨ¶ÈºÍ´¿¶ÈµÄ²â¶¨À´Ìá¸ßPCR·´Ó³µÄ³É¹¦ÂÊ¡£ÔÚPCRÀ©Ôö³¢ÊÔ²»Ë³ÀûµÄÇé¿öÏ£¬Ò²Äܹ»½øÒ»²½¶ÔDNA²úÆ·µÄÆëÈ«¶È½øÐмì²â£¬¾ßÌå²½ÖèÄܹ»²Î²éºËËá¼ì²âºÍºËËáÀ©ÔöµÄÓйØÄÚÈÝ¡£
°¸Àý¶þ£ºÓÃÓÚ³Á×éµÄÖÊÁ£DNAÌáÈ¡
ÓÃÓÚ³Á×éµÄÖÊÁ£¶ÔDNA²úÆ·µÄŨ¶È¡¢´¿¶ÈºÍÆëÈ«¶È¶¼ÒªÇó½Ï¸ß£¬²»È»ÎÞ·¨³É¹¦ÊµÏÖÖÊÁ£Ã¸ÇкÍøÁ¬µÄ²½Öè¡£
³¢ÊÔ²½Ö裺
1.´Óº¬ÓйýÒ¹Ôì¾Í´ó³¦¸Ë¾úµÄÊÔ¹ÜÖÐÈ¡³öÊÊÁ¿¾úÒºÖÃÓÚ΢Á¿ÀëÐĹÜÖУ¬µÍËÙÀëÐÄ£¨4000Xg£¬ 5min£©´¦ÖúóÊճɴ󳦸˾ú£¬³ýÈ¥Ôì¾ÍÒº¡£
2.ʹÓÃÖÊÁ£ÌáÈ¡ÊÔ¼ÁºÐ(Plasmid DNA extraction kit)ÌáÈ¡´ó³¦¸Ë¾úÖÊÁ£¡£µÀÀí¾úÌåÁѽâºó£¬²ÎÓëÖкÍÒº£¨Neutralization buffer£©¹ý΢ÐÍÖù£¬Ê¹DNAÌØÒì½áºÏÓÚÖùÉÏ£¬¶øÆäËûÔÓÖÊ»á¹ýÖùÏ´ÍÑ¡£×îºóÓÃÏ´ÍÑÒº(Elute buffer)Ï´ÏÂDNA¼´¿ÉµÃµ½ÖÊÁ£DNA²úÆ·¡£
3.¾ÊÔ¼ÁºÐÌáÈ¡ºóµÄÖÊÁ£DNAÓÐʱ±ØÒª¾µçÓ¾Çнº»ØÊյIJÙ×÷½«Ö¸±êÖÊÁ£DNAÓëÆäËûDNA·ÖÀë¡£ÇÐϵĽºÏû»¯ºó¾DNA´¿»¯ÊÔ¼ÁºÐ´¿»¯¼´¿ÉµÃµ½´¿¶È½Ï¸ßµÄÖ¸±êÖÊÁ£DNA¡£¾ßÌåµÄÄÚÈÝÄܹ»²Î²éºËËá¼ì²âµÄÓйØÄÚÈÝ¡£
¶þ¡¢³¢ÊÔÊÒÖеÄRNAÌáÈ¡
[ RNA Extraction: Principle, Procedure, Protocol and Importance ¨C Genetic Education]£º
RNAÌáÈ¡¹ý³ÌÓëDNAÀàËÆ£¬Ò²ÊÇͨ¹ýÁѽâϸ°ûºóͨ¹ýÓлúÈܼÁ£¨±½·Ó¡¢Âȷ¡¢ÒìÎì´¼£©³Á½µÔÓÖʵIJ½ÖèÀ´·ÖÀëRNA¡£µ«RNAµÄ²»±äÐÔ±ÈDNAµÍºÃ¶à£¬Òò¶ø¶ÔRNAÌáÈ¡¶ÔζȺʹ«È¾¶Ï¸ùµÄÒªÇó¸ü¸ß¡£ÊµÑвÙ×÷ͨ³£´ÓÒÔϼ¸¸ö½Ç¶ÈÀ´ÌáÉý³É¹¦ÂÊ£º½µµÍRNAË®½âø»îÐÔ¡¢ÌáÉýRNA²»±äÐÔ¡¢Ê¹RNAÓëDNAºÍµ°°×·ÖÀë¡¢½ö³Á½µRNA¡¢ÓÐЧȥ³ýDNA¡£
°¸ÀýÒ»£º×ÜRNAÌáÈ¡
³¢ÊÔ²½ÖèÓëDNAÌáÈ¡ÀàËÆ£¬µ«ÓлúÈܼÁµÄʹÓûáÓÐËù·ÖÆç¡£ÔÚ³õ´ÎÀëÐĺ󣬻ìºÏÎï»á·ÖΪÈý²ã£¬RNAÈÜÓÚÉϲãÎÞɫˮÏ࣬¶øDNAºÍµ°°×»á´¦ÓÚÖÐÑë²ã£¬×éÖ¯²ÐÔüµÈÔÓÖÊ´¦Óڵײã·Ó-ÂÈ·ÂÏàÖÐ2¡£
³¢ÊÔ²½Ö裺
1.ÏòÌáÈ¡ÑùÆ·ÖвÎÓëÁѽâÒº£¨ÈçTrizol£©£¬Áѽâϸ°ûÓë×éÖ¯£¬ÊÒξ²ÖÃ5-8·ÖÖÓ¡£
2.²ÎÓëÂȷ£¬³ä·Ö»ìÔȺóÀëÐÄ£¨4¡æ£¬12000rpm£¬10min£©£¬È¡³öÉÏÇåÒº¡£
3.ÏòÉÏÇåÒºÖвÎÓëÒì±û´¼³Á½µRNA£¬²¢ÀëÐÄ£¨4¡æ£¬12000rpm£¬10min£©ÆúÈ¥ÉÏÇå¡£
4.ÓÃ75%ÒÒ´¼Ï´µÓ²úÆ·Á½´Î£¬´ýÒÒ´¼»Ó·¢ºó²ÎÓëRNase-freeË®ÈÜ»¯²úÆ·¡£
³¢ÊÔÖÐÓõ½µÄJ9¼¯ÍŹú¼ÊÕ¾ºÄ²ÄºÍÒÇÆ÷£º
ǹͷ¡¢Î¢Á¿ÀëÐĹܡ¢£¨15¡¢50mL£©ÀëÐĹܡ¢ÃÔÄãÐýÎзÖÀëÆ÷£¨105003£©¡£